移液器是诊断试剂开发和应用中必不可少的实验室工具,但由于有如此多的选择,知道该选择哪种移液器会造成混乱。各种类型的移液器之间有什么区别?购买新的移液器时应注意哪些属性?如何正确使用它,并确保它在未来几年内保持可靠?本文将涵盖所有这些问题。
1、什么是移液器?
移液器是使用最广泛的实验室工具之一。它们被设计用来测量少量的液体和/或在容器之间转移液体。它们有各种各样的类型,从简单的血清学和Pasteur移液器到含有主体、柱塞和活塞的更复杂仪器。后者通常被称为微量移液器,有多种类型,具有许多不同的功能。下面将介绍所有这些。
1.1、不同类型的移液器和它们的工作原理
1.1.1、空气式与容积式移液器
空气式移液器:空气式移液器在活塞和样品之间有一个气垫。为了吸出液体,活塞首先下降,推出与所需液体体积相对应的空气体积,然后再向上移动,形成部分真空,由液体填充。
容积式移液器:在容积式移液器中,活塞与样品直接接触,所以是一次性吸头的一部分,而不是移液器本身,以避免交叉污染。吸液过程与空气式移液器相似:活塞向上移动,产生部分真空,由液体填充。
图1 | 移液器如何工作:空气式移液器与容积式移液器
实验室通常使用空气式移液器,因为其价格较低,而且很适合大多数液体,包括粘性和挥发性液体,只要使用正确的技术和移液器吸头(见3.1节)。
但是,如果你经常需要移取非常粘稠或非常易挥发的液体,容积式移液器可能更适合你的需要。容积式吸头的成本较高,因为有集成活塞,但由于吸头内没有气垫,挥发性液体无法蒸发,粘稠的样品被更有效地推出来。
此外,容积式移液器在移取冷、热样品时更准确,因为它们不受温度变化的影响。
1.1.2、可调式移液器与固定体积移液器
顾名思义,可调节体积的移液器涵盖了一定的体积范围,而固定体积的移液器则只设计为移取特定的体积。在购买移液器时,实验室通常选择可调体积的移液器,因为它们具有更大的灵活性,可以用于许多不同的应用。
然而,它们的精确度在最大移液量时是最高的,并且随着移液量的增加而略有下降,因此固定体积移液器可能更适合某些应用。
因为可调容积空气式移液器通常是实验室的首选,所以下面的章节将重点介绍这种移液器类型。
2 如何选择一个新的移液器
寻找合适的移液器可能会让人困惑。为了帮助你做出这一决定,我们概述了在选择新移液器时需要注意的几个问题。
2.1 手动与电子移液器
你应该决定的第一件事是你需要的是手动还是电子移液器。手动移液器被广泛使用,是很好的工具,但如果你有预算,那么从长远来看,电子移液器会物有所值,因为它有五个明显的优势:
改善人机工程学:将重复性劳损的风险降到最低,因为没有柱塞需要按下去移动活塞,也不需要扭动旋钮或柱塞来调节体积。
更好的精度和准确性:因为它们对操作者的依赖性更低。你还可以保存移液协议,以减少人工错误,防止操作者之间的差异性。
多种移液模式:避免了对单独的中继器、稀释器和滴定器移液器的需求。
直观的校准:具有内置的重力性能验证。只需输入分液量与目标量,它就会进行自我校准。许多电子移液器还提供校准提醒功能。
集成移液协议:具有预设或自定义程序,最大限度地减少操作员的错误。
如果你现在在想‘这些都很好,但是电子移液器很复杂,需要不断充电,而且很难清洗’,那么让我们告诉你更多使用电子移液器的优势。
2.2 可靠性
你转移的体积会大大影响移液的可靠性。如上所述,你应该始终选择能够处理所需体积的最小的移液器,因为可调体积的空气式移液器的精确度会随着设定体积的增加而降低。
如果在移液过程中不小心改变了体积,可靠性也会受到负面影响。因此,你应该选择一个具有避免意外改变体积的机制的移液器。另一个常见的问题是吸头松动、漏液或脱落,因此选择带有专门设计的吸头的移液器比使用通用吸头的移液器要好。
2.3 效率
用单道移液器填充微孔板很快就会成为一项非常乏味和容易出错的工作。使用多通道移液器可以让你一次转移多个样品,提高工作效率,防止错误和重复性劳损。如果你购买的多通道移液器具有可调节的吸头间距,甚至可以用于不同实验器皿格式之间的样品转移。
你所需要的通道数量,以及你是否需要可调的吸头间距,取决于你计划使用的实验室器皿类型。下表列出了最常见的移液器格式,以及它们最适合的实验室器皿类型。
2.4 人体工程学
在选择移液器时,应确保其重量轻、平衡性好,并能舒适地握在手中,适合左手和右手使用者。此外,吸头的加载和弹出力应尽可能低,以减少操作者的负担。
3 如何使用移液器
你应该做的第一件事是确保为你的实验选择合适的移液器。如上所述,可调节体积的空气式移液器在以最大容量进行移液时最为准确,因此你应始终选择能够处理所需体积的最小的移液器。
如果你的实验允许,你还应该确保在你开始工作之前,移液器、吸头和液体都已平衡到室温。这将防止移液器吸头内的气垫随温度变化而膨胀或收缩,这将对你的结果的准确性和精确性产生负面影响。
在移液过程中,还有一些其他事项需要注意:
通过抽吸和分配3次标称体积来预湿移液器吸头,使气垫加湿。
始终以不超过20度的角度握住移液器,以确保吸头内的静水压力保持一致。
将吸头浸入液体时,不应低于表面2-3毫米,以尽量减少吸头外部的液体留存量。
每次分配后,可能会有液滴粘附在吸头末端。为了清除它,你应该进行一次触摸关闭。
当你重复分装多个等分样品时,你应该丢弃系列中的第一个和最后一个分装,因为它们的相关体积误差最大。
3.1 正确的移液器吸头的影响
对结果的准确性和精确性有影响的不仅仅是使用正确的移液技术,还包括使用正确的吸头。例如,对于低表面张力或粘稠的溶液,低留量吸头产生的结果明显优于标准吸头。
3.2 如何移取粘性和挥发性液体
使用可调节体积的空气式移液器移取粘性和挥发性液体是一项挑战,但只要掌握正确的技术和移液器吸头就可以了。粘性液体应采用反向移液法缓慢吸出和分装。使用这种技术,吸出的液体比需要的量要大,这样可以补偿粘附在吸头内部的残留液体。对于粘稠的液体,低留量吸头是理想的选择,而对于粘度非常高的液体,或者容易产生泡沫的液体,建议使用宽口径的吸头。
移取挥发性液体时,一定要预湿吸头,吸液和分液时都要使用快速的移液速度,以减少蒸发的影响。在吸液和分液之间不要有不必要的停顿,使用反向移液来进一步减少蒸发对实际输送量的影响。
移液器通常在室温下用蒸馏水进行校准。当移取具有不同物理特性(比重和蒸汽压)的液体时,重新校准它们可能是有用的。
4 如何延长移液器的使用寿命
除了正确使用外,正确储存和清洁你的移液器,以及定期校准和维护,这对于确保它们多年来产生可重复的结果至关重要。
4.1 储存
切勿将移液器放置在台面上。相反,应将其垂直存放在一个支架上。这将确保困在移液器体内的任何液体残留物排出,并防止活塞错位或润滑剂积聚在移液器的一侧。由于移液器吸头可能会有液体残留,因此在完成移液后,你应始终将其排出。
否则,这些残留的液体会蒸发到移液器本体中。最后但并非最不重要的是,你应始终将移液器调至最大容量(如果你使用的是手动移液器),以使弹簧回到受力最小的位置。
4.2 清洁
在清洗移液器之前,一定要查阅移液器的操作手册。它通常包含关于你的移液器与常见清洁剂的化学相容性的详细信息,并告诉你如何拆卸和重新组装它。
清洁移液器的外部应该是你日常工作的一部分。只需用蘸有70%乙醇的无绒布轻轻擦拭即可。
清洁移液器的内部是一个更复杂、更耗时的过程,但对于单通道移液器来说,通常可以由操作者完成。首先,你必须把移液器拆开。根据你是作为常规清洗,还是因为它被污染,你不仅需要用蒸馏水清洗部件,还需要用合适的去污剂清洗。
之后,你应该检查部件是否有明显的损坏,让它们风干,并润滑活塞,然后再重新组装移液器。最后,通过进行泄漏测试和体积验证,简要地检查移液器的功能。
4.3 校准和服务
可以增加移液器寿命的最后一个方面是定期校准和服务。你应该每6到12个月对其进行校准和服务,以确保其保持准确和精确,并在昂贵的维修或更换不可避免之前发现和解决潜在的问题。还建议定期进行例行检查,这样你就能在两次校准之间对结果有信心。
5 结论
你现在知道了所有的技巧和窍门,可以找出最适合你的移液器,如何正确使用它,以及如何确保它忠实地为你服务多年。
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