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生物组织脂肪含量测定和去除
◆生物组织脂肪含量测定和去除
提取脂肪前烧瓶称重
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提取液转移至此烧瓶旋转浓缩近干后移至N2流下将多余溶剂吹走，直至天平称重无变化（百分位天平）
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称量提取后烧瓶重
↓
两次重量差即为脂肪
脂肪含量＝【（提取后烧瓶重－提取前烧瓶重）/提取样】×（1－组织水分百分含量）
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称脂后加50mLHexane溶解提取物
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15g酸性硅胶，搅拌磁子
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搅拌30mins
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过无水Na2SO4小柱
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5mLHexane清洗两次
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合并收集后浓缩
楼上氧化铝0.8 cmID,细柱，半湿法装柱
若是1.0cmID,则Al2O3用10g
柱中加30mLHexane
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8g Al2O3
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1cm Na2SO4
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预淋洗（30mL-40mLHexane洗脱）
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上样
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DCM/Hexane＝5：95 100mL洗脱PCBs
DCM/Hexane＝1:1 50mL洗脱dioxins
◆凝胶渗透色谱 GPC
填料： Bio-Beads SX3
GPC 柱型 30cm×25mmID(柱子下面有砂芯)
填料 30g于烧杯中
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加入DCM:Hexane（1：1，V：V）全部盖住
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铝箔纸盖住烧杯置于通风橱过夜，至少12hrs,填料充分溶胀
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搅动填料，并用吸管逐步将填料转移到柱中，中间打开四氟阀放去多余的溶剂
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全部转移后，上部留有10cm溶剂
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上端加塞，底部关阀
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整个柱子倒置后打开阀门
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振荡柱体，使填料逐渐整体均匀倒置
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关闭阀门，将柱子缓慢扶正，并且打开上面的磨口塞，可以看到填料均匀沉降直至完全
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应该无断层，无气泡，无沉降分界层
↓
500mL DCM：Hexane（1:1 ,V:V）淋洗，（注意要将溶剂混合均匀）
滴速 2－3滴/S
不用时关阀加塞密闭，上层留有5CM以上的溶剂，GPC使用溶剂均为DCM：
Hexane（1：1，V:V）若长时间没用，纯化前用100mL溶剂预淋洗
◆GPC洗脱
DCM：Hexane(1:1,V:V)
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100mL 预淋洗（量筒接）量筒1
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上样后，先用50 mL DCM：Hexane(1:1,V:V)去掉大分子（量筒接）量筒2
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另外量筒接70mL(DCM/Hexane=1/1)为PCB 量筒3
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另外量筒接50mL,量筒4
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量筒4与量筒2 50mL合并保存，以防重复实验时回收再分析
注意：
1．若GPC柱中物料层有气泡，则上面用塞子堵上，稍微晃一下柱子可以去除。若溶剂干了会造成断层。
2．GPC柱用前由于重心作用，上层发胀，所以需要释放一段洗脱溶剂，将发胀部分压下去，再上样。
◆N2吹
纯化后样品旋转蒸发
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转移入KD管后N2吹
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剩下0.2-0.3mL左右
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进样小瓶瓶芯中加15uL的壬烷
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Kd管中样品转移至瓶芯
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N2吹（温度不要太高30℃－60℃，太高有损失）
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洗KD管用DCM or Hexane至少洗2次，合并到进样小瓶瓶芯中
N2吹至瓶芯拐弯处上1mm－2mm处
↓
加入回收标保证进样小瓶中最后溶液约为20µL左右
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涡轮
注意 ：进样小瓶与瓶芯大小要搭配
加标前标准溶液需要提前从冰箱中拿出来平衡大约10几分钟
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